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產(chǎn)朊假絲酵母在生產(chǎn)中的應(yīng)用!

一、背景及概述
產(chǎn)朊假絲酵母,異名食用球擬酵母(Torulopsisutilis)或產(chǎn)朊圓酵母(Torulautilis)。真菌門、半知菌亞門、芽孢綱、隱球酵母目、隱球酵母科、假絲酵母屬的一種。其有性型稱為杰丁漢遜酵母(Hansenulajadinii)。在葡萄糖、酵母汁、蛋白胨液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)(25)3天后,細胞圓形、橢圓形或臘腸形,大小為3.5~4.5μm×7.0~13.0μm。液面無醭,管底有菌體沉渣。在麥芽汁瓊脂斜面上,菌落呈乳白色,平滑,有或無光澤,邊緣整齊或不整齊。在玉米粉瓊脂培養(yǎng)基上蓋上蓋玻片培養(yǎng)后,僅產(chǎn)生原始假菌絲、不發(fā)達的假菌絲或不產(chǎn)生假菌絲。不形成真菌絲。能發(fā)酵的糖類有葡萄糖、蔗糖和棉子糖,不發(fā)酵麥芽糖、半乳糖、乳糖和蜜二糖。能同化的碳源有葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、棉子糖、纖維二糖、D-木糖,不能同化半乳糖、乳糖、蜜二糖、可溶性淀粉、D-阿拉伯糖和L-阿拉伯糖。不分解脂肪。能利用KNO3、(NH4)2SO4和尿素作氮源。
本菌分布很廣,可從酒廠的酵母沉淀物、牛消化道、花朵和人的唾液等處分離到。因本菌能利用多種己糖、戊糖和尿素或是廉價工農(nóng)業(yè)副產(chǎn)品、廢料等合成營養(yǎng)豐富的蛋白質(zhì),例如,可利用造紙廠亞硫酸廢液、糖蜜、淀粉廠廢液和木材水解液作碳源,以尿素或硝酸鹽作氮源生長,其蛋白質(zhì)和維生素B含量均超過釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae),故是生產(chǎn)食用、藥用或飼料用單細胞蛋白的優(yōu)良菌種。
二、分類
經(jīng)過不斷的研究和試驗,酶母菌的研究大致經(jīng)歷了經(jīng)典分類學、化學分類學、分子分類學方法3個階段。常見的酵母菌可分為酵母菌屬、裂殖酵母屬、漢遜酵母屬、畢赤酵母屬、假絲酵母屬、球擬酵母屬、紅酵母屬。其中產(chǎn)朊假絲酵母菌屬于假絲酵母屬,其細胞為圓形、卵形或長形,多邊芽殖,有些種屬具有發(fā)酵能力,有些種屬能氧化碳氫化合物,用以生產(chǎn)單細胞蛋白,供食用或作飼料,但少數(shù)菌能致病。 
三、營養(yǎng)特性
產(chǎn)朊假絲酵母的菌體蛋白質(zhì)約占菌體干物質(zhì)的32%~75%,其含量因菌種、培養(yǎng)條件不同而差異較大。在菌體細胞中含有核糖核酸4.5%~8.5%和B族維生素約2%和多種礦物質(zhì)。產(chǎn)朊假絲酵母菌本身還含有豐富的酶類,如單胃蛋白酶、淀粉酶、纖維素酶及植酸酶等,這些酶類可以將淀粉、纖維素水解成小分子糖、氨基酸、醇類等易被消化和吸收的低分子物質(zhì)。產(chǎn)朊假絲酵母的細胞壁約占整體重量的20%,成分主要有內(nèi)壁的β-葡聚糖57%、外壁的甘露寡糖6.6%和糖蛋白22%,此外還有幾丁質(zhì)、蛋白質(zhì)、脂類和灰分等。甘露糖和β-葡聚糖具有免疫促進劑的功能,能夠激發(fā)或增強機體免疫功能。并且其菌體中所含有的脂類主要是類脂、磷脂、固醇等脂溶性化合物,固醇類主要是麥角固醇,其經(jīng)紫外線照射能轉(zhuǎn)變?yōu)榫S生素D2,是生產(chǎn)天然維生素D的主要來源
四、特點及生長條件 
1、菌體特點 
1)正常生長時的特點
細胞呈圓形、橢圓形或臘腸形,大小為3.5~4.5μm×7.0~13.0μm,以多邊出芽方式進行無性繁殖,形成假菌絲,沒有發(fā)現(xiàn)有性生殖現(xiàn)象以及有性孢子,其屬于半知菌類酵母菌。用麥芽汁固體培養(yǎng)基培養(yǎng),菌落呈乳白色,表面光滑濕潤,邊緣整齊或呈菌絲狀;用玉米固體培養(yǎng)基培養(yǎng),會產(chǎn)生原始狀假絲菌;用葡萄糖酵母汁蛋白胨液體培養(yǎng)基培養(yǎng),表面無菌膜。液體呈渾濁狀,管底有菌體沉淀。產(chǎn)朊假絲酵母屬化能異養(yǎng)型,能發(fā)酵葡萄糖、蔗糖和1/3的棉籽糖,不能發(fā)酵半乳糖、麥芽糖、乳糖、蜜二糖;能同化尿素、銨鹽和硝酸鹽,不分解蛋白質(zhì)和脂肪。其兼性厭氧,有氧條件下,進行有氧呼吸;無氧條件下,進行酒精發(fā)酵。最適生長溫度為25,最適生長pH為4.5~6.5。 
2)在工業(yè)生產(chǎn)中的特點
產(chǎn)朊假絲酵母菌在工業(yè)生產(chǎn)中也有廣泛應(yīng)用,其在工業(yè)生產(chǎn)中的特點包括:發(fā)酵密度高,在高密度發(fā)酵中細胞干重可達到92g·L-1,其蛋白質(zhì)和維生素B的含量都比啤酒酵母高;其能以尿素和硝酸作為氮源,在培養(yǎng)基中不需要加入任何生長因子即可生長;其能利用五碳糖和六碳糖,既能利用造紙工業(yè)的亞硫酸廢液,還能利用廉價的糖蜜、木材水解液等生產(chǎn)出可食用的蛋白質(zhì);不具有酵解抑制有氧氧化效應(yīng),因而在嚴格好氣的條件下不會產(chǎn)生乙醇。另外,產(chǎn)朊假絲酵母在工業(yè)中是一種極為重要的微生物,常被用于生產(chǎn)多種具有功能性的生物物質(zhì),例如谷胱甘肽及一些氨基酸和酶類。 
2、自然生長和誘變生長的條件 
1)生長條件 
溫度、搖床轉(zhuǎn)速、碳氮比等因素對產(chǎn)朊假絲酵母的生長都會產(chǎn)生影響。通過統(tǒng)計學分析,各因素對母菌生長影響不顯著(P>0.05)。試驗得到的生長條件為:發(fā)酵培養(yǎng)基(40mL·500mL-1)中按10%(v/v)的接種量接入種子后進行搖瓶發(fā)酵培養(yǎng),溫度27,搖床轉(zhuǎn)速200r·min-1,培養(yǎng)時間30h,碳氮比(葡萄糖和蛋白胨質(zhì)量比)為31時,菌體密度最大,生長效果最好。以產(chǎn)朊假絲酵母1807為試驗菌,培養(yǎng)條件為:250mL三角瓶裝液100mL,接種量10%,搖床轉(zhuǎn)速160r·min-1,溫度30,時間18h,結(jié)果得出葡萄糖利用率為91.09%,產(chǎn)得干酵母16.29g·L-1。 
2)菌種選育條件及誘變后發(fā)酵條件
誘變條件多種多樣,其中紫外照射誘變菌的方式相對簡便、易行。在15W紫外燈下照射120s,致死率為89%,得到蛋白質(zhì)31.4%的誘變菌株,比誘變前的22.9%提高37.12%。對紫外誘變后的菌株進行發(fā)酵條件的優(yōu)化,得到的最優(yōu)發(fā)酵條件為:以葡萄糖為碳源、以硫酸銨和酵母浸粉為混合氮源,在32條件下,培養(yǎng)箱轉(zhuǎn)速為160r·min-1進行培養(yǎng),可以得到蛋白質(zhì)含量為37%的酵母菌株。
五、在生產(chǎn)中的應(yīng)用
產(chǎn)朊假絲酵母菌屬于酵母菌,酵母菌的基本特性在一定程度上體現(xiàn)了產(chǎn)朊假絲酵母的特性,隨著對酵母菌的廣泛利用,一些較常用的酵母菌,例如釀酒酵母菌、熱帶假絲酵母菌、產(chǎn)朊假絲酵母菌等,其優(yōu)良特性在實際生產(chǎn)中發(fā)揮了重要作用。 
1、在處理馬鈴薯淀粉廢水中的應(yīng)用
通過pH、接種量、無機鹽(通過加入磷酸二氫鉀進行無機鹽補充)等對產(chǎn)朊假絲酵母處理馬鈴薯淀粉廢水的影響研究表明,在pH為5.0、產(chǎn)朊假絲酵母接種量為10%(體積分數(shù))、磷酸二氫鉀(質(zhì)量分數(shù)為0.1%)加入量為0.5g·L-1、廢水不滅菌的條件下,廢水處理效果和產(chǎn)朊假絲酵母生長最佳,且當廢水化學需要量(COD)為5074mg·L-1時,COD去除率達到74.86%,同可獲得2.23g·L-1的單細胞蛋白。
2、對奶牛體外瘤胃發(fā)酵參數(shù)的影響 
大量研究表明,酵母菌的添加有利于瘤胃pH的穩(wěn)定。試驗中較高水平(3.3×107cfu·mL-1)的產(chǎn)朊假絲酵母能顯著提高瘤胃氨態(tài)氮濃度,表明假絲酵母促進了日糧蛋白質(zhì)的降解。添加產(chǎn)朊假絲酵母能顯著提高瘤胃總揮發(fā)性脂肪酸量,降低乙酸濃度,表明產(chǎn)朊假絲酵母有促進瘤胃發(fā)酵類型向丙酸型發(fā)酵的趨勢。 
3、對奶牛體外瘤胃營養(yǎng)物質(zhì)消化率的影響 
試驗表明,隨著酵母菌量增加,產(chǎn)氣量逐漸增加,這可能是因為產(chǎn)朊假絲酵母刺激了瘤胃微生物的合成,從而促進了瘤胃發(fā)酵所致,產(chǎn)氣量與體內(nèi)干物質(zhì)消化率存在正相關(guān),體外干物質(zhì)消化率也有所增加。研究也表明,日糧中添加酵母菌制劑能刺激瘤胃微生物的合成,酵母培養(yǎng)物能促進蛋白分解菌生長,這可能與粗蛋白質(zhì)消化率提高有關(guān)。 
4、對有機酸利用的影響 
試驗表明,產(chǎn)朊假絲酵母能夠降解細胞外的L-蘋果酸、乳酸、琥珀酸和檸檬酸,不能降解乙酸、草酸和富馬酸;當培養(yǎng)基中含有葡萄糖和L-蘋果酸、琥珀酸或檸檬酸時,葡萄糖優(yōu)先被產(chǎn)朊假絲酵母利用,其他有機酸的利用受到葡萄糖的阻遏;當培養(yǎng)基中有葡萄糖和乳酸時,產(chǎn)朊假絲酵母在利用葡萄糖的同時,也可以利用乳酸,但乳酸被利用的速度非常緩慢;當培養(yǎng)基中只存在L-蘋果酸、琥珀酸、檸檬酸和乳酸作為碳源時,乳酸比較容易被菌體利用,而L-蘋果酸、琥珀酸和檸檬酸在被菌體利用的先后順序上并沒有明顯的區(qū)別。 
5、在風味酵母抽提物工藝中的應(yīng)用 
以產(chǎn)朊假絲酵母為原料制備了酵母抽提物,并以氨基態(tài)氮含量和抽提物得率為主要指標考察了對酵母自溶影響的關(guān)鍵因素,并在此單因素實驗基礎(chǔ)上對酵母自溶進行正交實驗,最后確定了酵母抽提物的最佳工藝條件。最佳工藝條件為:在15%酵母懸浮液中、75MPa壓力下循環(huán)均質(zhì)2次后,調(diào)初始pH6.5,并添加1.5%(w/w)的復合風味酶,50溫度下水浴自溶48h。 
6、生產(chǎn)單細胞蛋白 
通過利用經(jīng)航天誘變篩選的高產(chǎn)纖維素酶活菌株黑曲霉ZM-8和產(chǎn)朊假絲酵母SJ2,采用混菌固態(tài)發(fā)酵方式,來研究產(chǎn)朊假絲酵母SJ2接種量、接種時間和聯(lián)合發(fā)酵時間等因素在玉米秸稈為主要原料的培養(yǎng)基中對發(fā)酵產(chǎn)物中單細胞蛋白(SCP)含量的影響,結(jié)果表明,最優(yōu)發(fā)酵條件為先接黑曲霉,24h后接種5%的產(chǎn)朊假絲酵母,黑曲霉和產(chǎn)朊假絲酵母聯(lián)合發(fā)酵36h,在最優(yōu)發(fā)酵工藝條件下,發(fā)酵產(chǎn)物中SCP含量達到25.44%。
7、生產(chǎn)菌體蛋白
利用產(chǎn)朊假絲酵母處理燒酒廢水生產(chǎn)飼料酵母,培育出1個可以累積大量氮的產(chǎn)朊假絲酵母突變體,用其處理高濃度的燒酒廢水,可去除未稀釋的大麥燒酒廢水中有機物62.9%、總氮38.4%、總磷44.5%,處理后的大麥燒酒廢水經(jīng)冷凍干燥得到酵母生物量約16.7g·L-1,其中含有粗蛋白質(zhì)約60%,用H2SO4調(diào)控pH,不僅可提高廢水硫含量,而且還可增加酵母沉淀物中蛋氨酸的含量。研究表明,產(chǎn)朊假絲酵母在含糖18.81g·L-1、硫酸銨8.71g·L-1和硫酸鎂0.69g·L-1的條件下,可以獲得生物質(zhì)6.69g·L-1,蛋白質(zhì)含量可達50%。試驗結(jié)果表明,產(chǎn)朊假絲酵母能夠降解細胞外的L-蘋果酸、乳酸、琥珀酸和檸檬酸,不能降解乙酸、草酸和延胡索酸。
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