国产成人综合久久久久久,亚洲国产成人久久综合碰,精品露脸国产偷人在视频,99久久精品免费看国产,国产免费一区二区三区在线观看,好吊妞国产欧美日韩免费观看,国产精品免费看久久久无码

熱門(mén)搜索:A549    293T 金黃色葡萄球菌 大腸桿菌 AKK菌
購(gòu)物車(chē) 1 種商品 - 共0元
當(dāng)前位置: 首頁(yè) > 行業(yè)資訊 > 培養(yǎng)物的污染及防止

培養(yǎng)物的污染及防止

 

按現(xiàn)代的觀(guān)念,凡是混入培養(yǎng)環(huán)境中對(duì)細(xì)胞生存產(chǎn)生有害的成分和造成細(xì)胞不純的異物都應(yīng)該視為污染。根據(jù)這一概念,組織培養(yǎng)污染物應(yīng)包括生物(真菌、細(xì)菌、病毒和支原體)、化學(xué)物質(zhì)(影響細(xì)胞生存、非細(xì)胞所需的化學(xué)成分)、細(xì)胞(非同種的其他細(xì)胞)。其中一微生物最為多見(jiàn)。另外,隨著使用細(xì)胞種類(lèi)增多,不同細(xì)胞交*污染,尤其是Hela細(xì)胞的污染也時(shí)有發(fā)生,從而造成細(xì)胞不純。

一、污染途徑

污染物,特別是微生物常通過(guò)下列途徑進(jìn)入培養(yǎng)體系,造成污染

1 空氣:

空氣是微生物及塵埃顆粒傳播的主要途徑??諝饬鲃?dòng)性大,如果培養(yǎng)操作場(chǎng)地于外界隔離不嚴(yán)格或消毒不充分,外界不潔空氣很容易進(jìn)入造成污染。因此,培養(yǎng)設(shè)施不能設(shè)在通風(fēng)場(chǎng)所。無(wú)菌操作應(yīng)在凈化臺(tái)內(nèi)進(jìn)行,工作時(shí)要帶口罩,以免因講話(huà)、咳嗽等使外界污染進(jìn)入操作面,造成污染。

2 器材:

各種培養(yǎng)器皿、器械消毒不徹底和洗刷不干凈導(dǎo)致污染,另外需要對(duì)培養(yǎng)箱進(jìn)行定期消毒,防止形成污染

3 操作:

實(shí)驗(yàn)操作無(wú)菌觀(guān)念不強(qiáng),技術(shù)不熟練,使用污染的器皿或封瓶不嚴(yán)等,都可以造成污染。培養(yǎng)兩種細(xì)胞以上時(shí),操作不規(guī)范,交*使用吸管或培養(yǎng)液、瓶等有可能導(dǎo)致細(xì)胞交*污染。

4 血清:

有些血清在生產(chǎn)時(shí)就已經(jīng)被支原體或病毒等污染,變成了污染。

5 組織樣本:

原代培養(yǎng)的污染多數(shù)來(lái)源于組織樣本;取材時(shí)碘酒消毒后脫碘不徹底,可造成碘混入組織,細(xì)胞或培養(yǎng)液中,影響細(xì)胞細(xì)胞生長(zhǎng)。

二、污染對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞的影響及污染的檢測(cè)

由于體外培養(yǎng)細(xì)胞自身沒(méi)有抵抗污染的能力,而且培養(yǎng)基中的抗生素抗污染能力有限,因而培養(yǎng)細(xì)胞一旦發(fā)生污染多數(shù)將無(wú)法挽回。細(xì)胞污染早期或污染程度較輕時(shí),如果能及時(shí)去除污染物,部分細(xì)胞有可能恢復(fù)、但是當(dāng)污染物持續(xù)存在培養(yǎng)環(huán)境中,輕者細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢,分類(lèi)象減少,細(xì)胞變得粗糙,輪廓增強(qiáng)細(xì)胞漿出現(xiàn)顆粒、污染較嚴(yán)重,細(xì)胞增值停止,分裂象消失,細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)大量堆積物,細(xì)胞變圓、脫壁。

(一)細(xì)菌污染對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞的影響及污染物的檢測(cè)

常見(jiàn)的污染細(xì)菌有大腸桿菌、假單孢菌、葡萄球菌等。細(xì)菌污染初期由于培養(yǎng)體系的抗生素作用,其繁殖處于抑制狀態(tài),細(xì)胞生長(zhǎng)不受明顯影響,污染情況用倒置顯微鏡觀(guān)察不易判斷。懷疑培養(yǎng)細(xì)胞有細(xì)菌污染時(shí),取10ml細(xì)胞懸液離心1000轉(zhuǎn)5分鐘,沉淀中加入無(wú)抗生素培養(yǎng)液2ml,將細(xì)胞放培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

如果培養(yǎng)無(wú)真的細(xì)菌污染,24小時(shí)內(nèi)可以獲得陽(yáng)性結(jié)果。當(dāng)污染的細(xì)菌量比較大或者細(xì)菌增殖到一定基數(shù)時(shí),大約每20分鐘一代,會(huì)使培養(yǎng)系統(tǒng)中很快產(chǎn)生大量細(xì)菌,后者不僅可以消耗培養(yǎng)系統(tǒng)中的養(yǎng)分,還能釋放大量代謝產(chǎn)物。幾個(gè)小時(shí)后,增殖的細(xì)菌就可以導(dǎo)致培養(yǎng)液外觀(guān)渾濁,肉眼就可以判斷。細(xì)菌污染大多數(shù)可以改變培養(yǎng)液pH,使培養(yǎng)液變渾濁、變色。用相差顯微鏡觀(guān)察,可見(jiàn)滿(mǎn)視野都是點(diǎn)狀的細(xì)菌顆粒,原來(lái)的清晰培養(yǎng)背景變得模糊,大量的細(xì)菌甚至可以覆蓋細(xì)胞,對(duì)細(xì)胞的生存構(gòu)成威脅。用青霉素、鏈霉素可以預(yù)防細(xì)菌污染有效。

(二)真菌污染對(duì)細(xì)胞的影響及污染物的檢測(cè)

微生物污染中以真菌最多,真菌種類(lèi)繁多,形態(tài)各異,但是污染后易于發(fā)現(xiàn),大多呈白色或淺黃色小點(diǎn)漂浮于培養(yǎng)液表面,肉眼可見(jiàn);有的散在生長(zhǎng),鏡下可見(jiàn)呈絲狀、管狀、樹(shù)枝狀,縱橫交錯(cuò)穿行于細(xì)胞之間。念珠菌和酵母菌卵圓形,散在細(xì)胞周邊和細(xì)胞之間生長(zhǎng)。真菌生長(zhǎng)迅速,能在短時(shí)間內(nèi)抑制細(xì)胞生長(zhǎng)、產(chǎn)生有毒物質(zhì)殺死細(xì)胞??拐婢苿?duì)預(yù)防和排除真菌污染有效。

(三)支原體污染對(duì)細(xì)胞影響及污染物的檢測(cè)

細(xì)胞培養(yǎng)(特別是傳代細(xì)胞)被支原體污染是個(gè)世界性問(wèn)題,是細(xì)胞培養(yǎng)最常見(jiàn)的、干擾試驗(yàn)結(jié)果的一種污染。但由于不易被察覺(jué),有些污染的細(xì)胞仍在被應(yīng)用。研究表明,95%以上是以下四種:口腔支原體(M.orale)、精氨酸支原體(M.arginini)、豬鼻支原體(M.hyorhinis)和萊氏無(wú)膽甾原體(A.laidlawii),為牛源性。以上是最常見(jiàn)的污染細(xì)胞培養(yǎng)的支原體菌群,但能夠污染細(xì)胞的支原體種類(lèi)是很多的,國(guó)外調(diào)查證明,大約有二十多種支原體能污染細(xì)胞,有的細(xì)胞株可以同時(shí)污染兩種以上的支原體。據(jù)查,目前各實(shí)驗(yàn)室使用的二倍體細(xì)胞和傳代細(xì)胞中約有11%的細(xì)胞受到支原體污染。

污染來(lái)源包括工作環(huán)境污染、操作者本身污染(一些支原體在人體是正常菌群)、培養(yǎng)基污染、污染支原體的細(xì)胞造成的交*污染、實(shí)驗(yàn)器材帶來(lái)的污染和用來(lái)制備細(xì)胞的原始組織或器官的污染。支原體污染后,因?yàn)樗鼈儾粫?huì)使細(xì)胞死亡可以與細(xì)胞長(zhǎng)期共存,培養(yǎng)基一般不發(fā)生渾濁,細(xì)胞無(wú)明顯變化,外觀(guān)上給人以正常感覺(jué),實(shí)則細(xì)胞手到多方面潛在影響,如引起細(xì)胞變形,影響DNA合成,抑制細(xì)胞生長(zhǎng)等。

細(xì)胞培養(yǎng)中,主要從以下幾個(gè)方面來(lái)預(yù)防支原體的污染:
    
控制環(huán)境污染;
    
嚴(yán)格實(shí)驗(yàn)操作;
    
細(xì)胞培養(yǎng)基和器材要保證無(wú)菌;
    
在細(xì)胞培養(yǎng)基中加入適量的抗生素。

支原體污染細(xì)胞后,特別是重要的細(xì)胞株,有必要清除支原體,常用方法有抗生素處理、抗血清處理、抗生素加抗血清和補(bǔ)體聯(lián)合處理。支原體最突出的結(jié)構(gòu)特征是沒(méi)有細(xì)胞壁,一般來(lái)講,對(duì)作用于細(xì)胞壁生物合成的抗生素,如 -內(nèi)酰胺類(lèi)、萬(wàn)古霉素等完全不敏感;對(duì)多粘菌素(polymycin)、利福平、磺胺藥物普遍耐藥。對(duì)支原體最有抑制活性及常用于支原體感染治療的抗生素是四環(huán)素類(lèi)、大環(huán)內(nèi)酯類(lèi)及一些氟喹諾酮;其他類(lèi)抗生素如氨基糖苷類(lèi)、氯霉素對(duì)支原體有較小抑制作用,所以常不用來(lái)作為支原體感染的化學(xué)治療劑。

(四)細(xì)胞交叉污染對(duì)細(xì)胞的影響及污染物的檢測(cè)

細(xì)胞培養(yǎng)中,細(xì)胞間交*污染并不罕見(jiàn),多是由于在培養(yǎng)中操作時(shí)各種細(xì)胞同時(shí)進(jìn)行,混雜使用器皿和液體所致,這種污染能使細(xì)胞的生長(zhǎng)特性、形態(tài)特征等發(fā)生變化,有些變化較輕、不易察覺(jué),有些可能由于污染的細(xì)胞具有生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)最終壓過(guò)原來(lái)細(xì)胞而導(dǎo)致細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制,最終死亡。常用觀(guān)察細(xì)胞形態(tài)學(xué)、分析生長(zhǎng)特性和核型、檢測(cè)細(xì)胞的標(biāo)記物等方法檢測(cè)交*污染的細(xì)胞。

三、污染的預(yù)防:

防止污染,預(yù)防是關(guān)鍵,預(yù)防措施應(yīng)該貫穿整個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)的始終。

1.器皿準(zhǔn)備中的預(yù)防:

用于細(xì)胞培養(yǎng)的器皿應(yīng)該嚴(yán)格消毒,做到真正潔凈;應(yīng)該無(wú)菌的物品,要做到消毒嚴(yán)格、真正無(wú)菌;器皿的運(yùn)輸、貯存過(guò)程中,要嚴(yán)格操作,謹(jǐn)防污染。

2.開(kāi)始操作前的預(yù)防:

應(yīng)當(dāng)按廠(chǎng)家規(guī)定,定期清洗或更換超凈臺(tái)的空氣濾網(wǎng),請(qǐng)專(zhuān)職人員定期檢查超凈臺(tái)的空氣凈化標(biāo)準(zhǔn);檢查培養(yǎng)皿是否有消毒標(biāo)志,有條件得實(shí)驗(yàn)室可以使用一次性用品;檢查新配置的培養(yǎng)液,確認(rèn)無(wú)菌方可使用;操作前提前半小時(shí)啟動(dòng)超凈臺(tái)的紫外燈消毒;操作應(yīng)戴口罩,消毒雙手。

3.操作過(guò)程中的預(yù)防;

主要包括:超凈臺(tái)內(nèi)放置的所有培養(yǎng)瓶瓶口不能與風(fēng)向相逆,不允許用手觸及器皿的無(wú)菌部分,如瓶口和瓶塞內(nèi)側(cè);在安裝吸管冒、開(kāi)啟或封閉瓶口操作時(shí)要經(jīng)過(guò)酒精燈燒灼,并在火焰附件工作;吸取培養(yǎng)液、細(xì)胞懸液等液體時(shí),應(yīng)專(zhuān)管專(zhuān)用,防止污染擴(kuò)大或造成培養(yǎng)物的交*污染;使用培養(yǎng)液前,不易較早開(kāi)啟瓶口;開(kāi)瓶后的培養(yǎng)瓶應(yīng)保持斜位,避免直立;不再使用的培養(yǎng)液應(yīng)立即封口;培養(yǎng)的細(xì)胞在處理之前不要過(guò)早的暴露空氣中;操作時(shí)不要交談、咳嗽,以防唾沫和呼出氣流引發(fā)污染;操作完畢后應(yīng)將工作臺(tái)面整理好,并消毒擦拭工作面,關(guān)閉超凈臺(tái)。

4.其他預(yù)防:

及早凍存培養(yǎng)物;重要的細(xì)胞株傳代工作應(yīng)有兩個(gè)人獨(dú)立進(jìn)行;購(gòu)入的未滅活血清應(yīng)采取56度水浴滅活30分鐘使血清的補(bǔ)體和支原體滅活;為了避免誘導(dǎo)抗藥細(xì)菌,應(yīng)定期更換培養(yǎng)系統(tǒng)的抗生素,或盡可能不用抗生素;對(duì)新購(gòu)入的細(xì)胞株應(yīng)加強(qiáng)觀(guān)察,防止外來(lái)的污染源;定期消毒培養(yǎng)箱。

四、污染的排除:

培養(yǎng)的細(xì)胞一旦污染應(yīng)及時(shí)處理,防止污染其他細(xì)胞。通常選高壓滅菌被污染的細(xì)胞,然后棄掉。如果有價(jià)值的細(xì)胞被污染,并且污染程度較輕,可以通過(guò)及時(shí)排除污染物,挽救細(xì)胞恢復(fù)正常。常用的排除微生物污染的方法有以下幾種:

1 抗生素排除法:

抗生素是細(xì)胞培養(yǎng)中殺滅細(xì)菌的主要手段。各種抗生素性質(zhì)不同,對(duì)微生物作用也不同,聯(lián)合應(yīng)用比單用效果好,預(yù)防性應(yīng)用比污染后應(yīng)用好;如果發(fā)生微生物污染后再使用抗生素,常難以根除。有的抗生素對(duì)細(xì)菌僅有抑制作用,無(wú)殺滅效應(yīng)。反復(fù)使用抗生素還能使微生物產(chǎn)生耐藥性,而且對(duì)細(xì)胞本身也有一定影響,因此有人主張盡量不用抗生素處理,當(dāng)然,一些有價(jià)值的細(xì)胞被污染后,仍需要用抗生素挽救,在這種情況下,可采用510倍于常用量的沖擊法,加入高濃度抗生素后作用2448小時(shí),再換入常規(guī)的培養(yǎng)液,有時(shí)可以奏效。

2 加溫除菌:

根據(jù)支原體耐熱性能差的特點(diǎn)。有人將受支原體污染的細(xì)胞置于41度中作用510小時(shí)(最長(zhǎng)可以達(dá)18小時(shí))殺滅支原體。但是41度對(duì)細(xì)胞本身應(yīng)有較大影響,故在處理前,應(yīng)先進(jìn)行預(yù)試驗(yàn),確定最大限度殺傷支原體而對(duì)細(xì)胞影響較小的處理時(shí)間。

3 動(dòng)物體內(nèi)接種:

受微生物污染的腫瘤細(xì)胞可以接種到同種動(dòng)物皮下或腹腔,借動(dòng)物體內(nèi)免疫系統(tǒng)消滅掉微生物,腫瘤細(xì)胞卻能在體內(nèi)生長(zhǎng),待一定時(shí)間,從體內(nèi)取出再進(jìn)行培養(yǎng)繁殖。

4 與巨噬細(xì)胞共培養(yǎng):

在良好的體外培養(yǎng)條件下巨噬細(xì)胞可以存活710天,并可以分泌一些細(xì)胞因子支持其他細(xì)胞的科隆生長(zhǎng)。與體內(nèi)情況相似,巨噬細(xì)胞在體外條件下仍然可以吞噬微生物并將其消化。利用96孔板將極少培養(yǎng)細(xì)胞與巨噬細(xì)胞共培養(yǎng),可以在高度稀釋培養(yǎng)細(xì)胞、極大地降低微生物污染程度地同時(shí),更有效地發(fā)揮巨噬細(xì)胞清除污染地效能。本方法與抗生素聯(lián)合應(yīng)用效果更佳。

安图县| 紫金县| 色达县| 中山市| 涟源市| 张北县| 库伦旗| 常宁市| 武平县| 壶关县| 化德县| 金昌市| 绍兴县| 尚义县| 舟山市| 饶平县| 镇赉县| 龙州县| 东方市| 安多县| 巩义市| 东方市| 治县。| 涪陵区| 綦江县| 萍乡市| 会理县| 乐东| 峨眉山市| 循化| 虹口区| 新安县| 宣恩县| 南乐县| 淅川县| 邛崃市| 高邑县| 阿拉尔市| 大埔区| 阿鲁科尔沁旗| 黄平县|